Informace o publikaci
Funkční analýza separovaných alel v kvasinkách: spolehlivá metoda k určení statutu nádorového supresoru p53
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2005 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Dny diagnostické, prediktivní a experimentální onkologie |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Onkologie a hematologie |
| Klíčová slova | FASAY; p53; p53 transactivation; gap repair |
| Popis | FASAY je semikvantitativní metoda pro detekci mutací p53 v klinickém materiálu, obvykle v nádorových tkáních a periferní krvi. Protein p53 je odvozen z mRNA izolované z testovaného materiálu pomocí RT-PCR a jeho transaktivační schopnost je vyhodnocena v kvasinkových buňkách prostřednictvím ADE2 reportéru. Transaktivace proteinem p53 je stanovena podle barvy kvasninkových kolonií na agarových plotnách s nízkým obsahem adeninu. Kvasinkové buňky tvoří velké bílé kolonie pokud byl reportérský gen aktivován funkčním proteinem p53 nebo malé červené kolonie, pokud reportér nebyl aktivován. FASAY ná tyto výhody: (1) analyzuje obě alely p53 odděleně, (2) její vysoká citlivost umožňuje detekci mutací p53 i pokud v případě, že mutovaných buněk je v buněné populaci pouhých 10%, (3) umožňuje rozlišení plně a částečně inaktivujících mutací, (4) analyzuje podstatnou část genu p53, (5) umožňuje snadnou přípravu templátů pro sekvenování p53. |
| Související projekty: |