Informace o publikaci
Změny obsahu lysozymu a proteinového spektra hemolymfy zavíječe voskového (Galleria mellonella L.) během vývoje
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2007 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Housenky (larvy) zavíječe voskového (Galleria mellonella L., Lepidoptera, Pyralidae) byly chovány ve tmě při teplotě 30 C na umělé půdě podle Haydaka. Celkový larvální vývoj trvá přibližně 32 dní a dělí se do sedmi instarů. Následuje stádium kukly, ze kterého se líhnou dospělci za 8-10 dní, pouze u kukel lze rozlišit pohlaví. Během vývoje byla sledována biometrická data včetně fotodokumentace. Pro analýzu hemolymfy byly použity vzorky z každého vývojového dne předposledního a posledního (VI. - 3 dny a VII.- 8 dní) larválního instaru a začátek, střed a konec stádia kukly. V nižších instarech nebylo možné odebrat dostatečné množství hemolymfy vzhledem k malé velikosti housenek. Cílem práce bylo porovnat množství lysozymu v hemolymfě a stanovit rozdíly v proteinovém spektru hemolymfy posledních dvou larválních instarů a kukel různého stáří. Koncentrace lysozymu byla stanovena metodou radiální difúze v agaróze využívající bakterii Micrococcus luteus, která je citlivá na působení lysozymu. Průměr difúzní zóny je přímo úměrný bakteriolytické aktivitě vzorku a po přepočtu podle kalibrační křivky je množství lysozymu vyjádřeno v mg/ml hemolymfy. Dále byla odebraná hemolymfa zpracována metodikou SDS-PAGGE (polyakrylamidová gradientová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného). Gely obarvené stříbrem byly vyhodnoceny na videodenzitometru v programu Molecular Analyst. K výrazným změnám v obsahu lysozymu během larválního vývoje nedochází. Jeho množství se pohybuje během celého vývoje kolem 0,4 mg/ml hemolymfy. V pupálním vývoji bylo množství naměřeného lysozymu menší, nejnižší koncentrace lysozymu byla zjištěna na začátku stadia kukly. Směrem ke konci pupálního stadia množství lysozymu rostlo. V proteinovém spektru hemolymfy bylo detekováno 12 dobře rozlišitelných proteinových frakcí. Nejvýrazněji jsou zastoupeny lipophoriny (apolipophorin-I a apolipophorin-III) a zásobní proteiny, jejichž množství (koncentrace) se zvyšuje se stářím larev. |