Publication details
Dopad varianty S1021Qfs*98-hERG na funkci proteinu Kv11.1
| Title in English | Impact of S1021Qfs*98-hERG variant on the function of Kv11.1 protein |
|---|---|
| Authors | |
| Year of publication | 2024 |
| Type | Conference abstract |
| MU Faculty or unit | |
| Citation | |
| Description | Úvod: Protein Kv11.1, kódovaný genem hERG (z angl. human ether-a-go-go related gene), vede rychlou komponentu zpožděného draslíkového proudu IKr, která se významně podílí na repolarizaci myokardu. Dopadem mutace v genu hERG, která snižuje funkčnost jeho proteinového produktu, je tedy zpoždění repolarizace a riziko vzniku arytmií. U naší probandky s diagnózou idiopatické fibrilace komor (iVF) byly nalezeny dvě mutace v genu hERG, a to S1021Qfs*98 a A228V. Cílem naší práce je zmapovat dysfunkci IKr kanálu způsobenou těmito mutacemi. V tomto příspěvku se zaměřujeme na funkční analýzu mutace S1021Qfs*98. Materiál a metody: Pro účely posouzení aktivity kanálu byla použita metoda whole cell patch clamp v módu vnuceného napětí při teplotě 37 °C. Gen hERG byl přechodně exprimován v buňkách linie CHO (z angl. Chinese hamster ovary), a to ve formě bez mutace (wild type, WT) nebo s mutací S1021Qfs*98. Výsledky: Registrovaný proud při napětí relevantním pro fázi plató akčního napětí (0 mV) poklesl o 70 % (při 0 mV: 219,4 pA u WT vs. 65,3 pA u S1021Qfs*98; P < 0,01, n = 17 a 18 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta aktivace ?act nebyla signifikantně rozdílná (při 0 mV: 714,6 ms u WT vs. 571,6 ms u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 19 a 14 u WT, resp. S1021Qfs*98). Napětí, při kterém dochází k poloviční aktivaci kanálu V1/2 a sklon křivky k nejevily významné rozdíly (V1/2 = 2,75 mV a k = 8,64 u WT vs. V1/2 = 4,06 mV a k = 8,90 u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 17 a 18 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta deaktivace ?deact nevykazovala žádné statisticky významné změny (při -90 mV: 122,1 ms u WT vs. 144,2 ms u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 15 a 16 u WT, resp. S1021Qfs*98). Signifikantní rozdíly nebyly pozorovány ani u parametrů popisujících napěťovou závislost ustálené inaktivace (V1/2 = -59,1 mV a k = 21,66 u WT vs. V1/2 = -59,1 mV a k = 24,83 u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 14 a 8 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta inaktivace ?inact byla u mutovaných kanálů delší o zhruba 65 % (při 0 mV: 5,9 ms u WT vs. 9,1 ms u S1021Qfs*98; P < 0,01, n = 15 a 11 u WT, resp. S1021Qfs*98). Závěr: Významný pokles proudu vypovídá o loss-of-function charakteru mutace S1021Qfs*98 a svědčí o jejím patogenním charakteru. Navzdory tomu nebyly zaznamenány žádné statisticky významné rozdíly u časové konstanty aktivace a deaktivace proudu a rovněž není rozdíl v jeho napěťové závislosti ustálené aktivace a inaktivace. Pozorované prodloužení časové konstanty inaktivace bylo signifikantní, avšak nemůže vysvětlit pozorovaný pokles IKr. V současné době se proto zaměřujeme na hodnocení celkové i povrchové exprese přirozených a mutovaných IKr kanálů s cílem objasnit původ pozorované dysfunkce. |
| Related projects: |