Informace o projektu
Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
- Kód projektu
- GA203/06/0047
- Období řešení
- 1/2006 - 12/2008
- Investor / Programový rámec / typ projektu
-
Grantová agentura ČR
- Standardní projekty
- Fakulta / Pracoviště MU
-
Přírodovědecká fakulta
- prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
- doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
- Mgr. Andrea Klimíčková
- Mgr. Jiří Konečný, Ph.D.
- doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.
- Klíčová slova
- kapilární elektroforéza, xenobiotika, metabolismus
Cílem tohoto projektu je zdokonalit a rozšířit aplikační množnosti kapilární elektroforézy, speciálně její modifikace metody EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) pro stanovení aktivity a studium membránově vázaných enzymů. Konkrétně bude studie zaměřena na skupinu důležitých detoxikačních enzymů – cytochromy P450, které se v organismu podílí mimo jiné na metabolismu léčiv, jejich detoxikaci, případně aktivaci. Hlavní pozornost bude zaměřena na možnost kombinace metody EMMA s technikou částečného plnění kapiláry, při které je část kapiláry naplněna pufrem optimálním pro příslušnou enzymovou reakci, zatímco zbytek kapiláry základním elektrolytem optimálním pro separaci substrátů a především produktů příslušné enzymové reakce. Tím by měla být odstraněna hlavní limitace metody EMMA, kterou je právě potřeba stejného pufru – základního elektrolytu jak pro enzymovou reakci, tak pro vlastní separaci. Uvedená metoda bude využita pro stanovení aktivity a studium různých izoenzymů cytochromů P450 a to za použití různých módů kapilární elektroforézy – kapilární elektroforézy ve volné kapiláře, micelární elektrokinetické kapilární chromatografie, případně chirální kapilární elektroforézy. Bude přitom použita klasická UV-VIS detekce s diodovým polem, pro identifikaci analytů bude testována MS v off-line uspořádání. Jako zdroj cytochromů P450 bude využita mikrosomální frakce, v případě dostupnosti rekombinantní formy cytochromů P450. Jako substráty bude testována celá řada důležitých farmakologických substancí. Hlavní výhodou této metody je malá spotřeba chemikálií, což je důležité především v případě enzymových preparátů, substrátů, případně inhibitorů. Automatizace všech kroků vlastního stanovení navíc eliminuje možné experimentální chyby.
Publikace
Počet publikací: 36
2009
-
Integration of on-line protein digestion by trypsin in capillary electrophoresis by means of electrophoretically mediated microanalysis
Electrophoresis, rok: 2009, ročník: 30, vydání: 13
2008
-
Application of EMMA methodology for on-capillary protein digestion in proteomic research
Book of Abstracts 22nd International Symposium on MicroScale Bioseparations and Methods for Systems Biology, rok: 2008
-
Application of Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography for Evaluation of Inhibitory Effects on Cytochrome P450 Reaction
Journal of Chromatography A, rok: 2008, ročník: 1189, vydání: 1-2
-
Capillary Microreaction Method Development for Drug Discovery Support
Book of Abstracts 22nd International Symposium on MicroScale Bioseparations and Methods for Systems Biology, rok: 2008
-
Comparison of electrophoretic methods for dextromethorphan metabolites separation obtained by in vitro incubation with microsomes
BOOK OF ABSTRACTS 16th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques, rok: 2008
-
Comparison of electrophoretic methods for dextromethorphan metabolites separation prepared by in vitro incubations
Book of Abstracts CECE 2008, rok: 2008
-
Electrophoretically mediated microanalysis as a tool in proteomic research as a tool in proteomic research
Book of abstracts 16th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques, rok: 2008
-
HPLC a ELISA stanovení asymetrického dimethylargininu u akutního infarktu myokardu
52. Studentská vědecká konference - Program a sborník abstrakt, rok: 2008
-
Microreaction in CE for drug metabolism studies (Lecture)
Proceeding of 16th International Conference "Analytical Methods and Human Health"., rok: 2008
-
On-capillary microreaction electrophoretic technique utilizing microsomes as an enzymatic system in drug metabolism studies
XII. Setkání biochemiků a molekulárních biologů, rok: 2008